怎么测定唾液淀粉酶的最适ph

在底物过量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同的条件下，接近最适pH的反应体系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅，吸光度越小，利用分光光度计测出各管的吸光度后，取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的pH值即为唾液淀粉酶的最适pH。

一、材料与方法仪器

吸量管(5mL，1mL)，试管，试管架，小烧杯，722型分光光度计，恒温箱，吸耳球试剂

二、方法

相同时间内，在温度、酶浓度相同、pH不同的条件下，酶的活度不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉与过量碘液生成的颜色不同，通过在660nm测量吸光度，得出酶的最适pH范围。

操作步骤：

1、唾液的获取

蒸馏水漱口后在口中含蒸馏水，适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于事先准备好的容器中即可，在实验过程中应注意酶的失活，为了防止此现象发生应将此液体置于冰水中冷却。

2、不同pH缓冲液配制

根据下表配置各个pH值的缓冲溶液各10ml

3、淀粉用量的确定(为了更好观察颜色变化，可以加入适量蒸馏水使总体积相同。混匀，观察现象，并选择颜色变化适中一支，记录其用量。)

4、酶液稀释倍数确定(为了更好观察颜色变化，可以加入适量蒸馏水使总体积相同，混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其稀释倍数。)

5、最适pH确定(蒸馏水调零，测定660nm处吸光度A，最后以A为纵坐标，pH为横坐标作图，取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值。)

从上述的实验中或许可以得出6.8为曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值。但是需要注意的是淀粉酶的测定结果受方法的影响较大，怎么测定唾液淀粉酶的最适ph?不同方法参考值亦有所不同，临床所用方法也较多，因此必须了解所用测定方法和其参考值，才能作出正确的诊断。